La sala è dedicata ai pittori toscani appartenenti alla fine del tredicesimo - inizio quattordicesimo secolo ed espone i dipinti più antichi della Galleria degli Uffizi.
Mettendo a confronto le tre enormi pale d'altare dipinte da tre diversi artisti, Duccio di Buoninsegna, Cimabue e Giotto e rappresentanti ognuna il medesimo soggetto, la Maestà, ovvero la Vergine Maria seduta in trono con Gesù in grembo, si riesce a percepire l'evoluzione dallo stile Gotico e Bizantino ad una concezione alquanto più "moderno" dello spazio e della rappresentazione del corpo umano.
Oltre ad altre opere, la sala espone due croci dipinte di anonimi Maestri Toscani ed il Polittico di Badia di Giotto.